উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রধানত ইনজেকশন সিস্টেম, ইনফিউশন সিস্টেম, সেপারেশন সিস্টেম, ডিটেকশন সিস্টেম এবং ডেটা প্রসেসিং সিস্টেম অন্তর্ভুক্ত থাকে। নিম্নলিখিত তাদের নিজ নিজ রচনা এবং বৈশিষ্ট্য পরিচয় করিয়ে দেবে.
1. ইনজেকশন সিস্টেম সাধারণত একটি ডায়াফ্রাম ইনজেক্টর বা একটি উচ্চ-চাপ ইনজেকশন চেম্বার ব্যবহার করে ইনজেকশন অপারেশন সম্পূর্ণ করতে, একটি ধ্রুবক ইনজেকশন ভলিউম সহ। নমুনা বিশ্লেষণের প্রজননযোগ্যতা উন্নত করার জন্য এটি উপকারী।
2. ইনফিউশন সিস্টেম তিনটি অংশ নিয়ে গঠিত: একটি উচ্চ-চাপ পাম্প, একটি মোবাইল ফেজ জলাধার এবং একটি গ্রেডিয়েন্ট মিটার৷ একটি উচ্চ-চাপ পাম্পের সাধারণ চাপ হল l। 47-4.4X107Pa, সামঞ্জস্যযোগ্য এবং স্থিতিশীল প্রবাহ হার। যখন উচ্চ-চাপের মোবাইল ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামের মধ্য দিয়ে যায়, তখন এটি কলামের ভিতরে নমুনার প্রসারণ প্রভাবকে কমাতে পারে, কলামের ভিতরে চলাচলের গতিকে ত্বরান্বিত করতে পারে, বিচ্ছেদ ডিগ্রি উন্নত করতে পারে এবং নমুনা পুনরুদ্ধার করতে পারে। নমুনার জৈবিক কার্যকলাপ বজায় রাখার জন্য উপকারী। মোবাইল ফেজ স্টোরেজ ত্রুটি এবং গ্রেডিয়েন্ট বিশ্লেষক স্থির ফেজ এবং নমুনার বৈশিষ্ট্য অনুসারে মোবাইল ফেজ পরিবর্তন করতে পারে, যার মধ্যে ইলুয়েন্টের পোলারিটি, আয়ন শক্তি এবং পিএইচ মান পরিবর্তন করা বা প্রতিযোগিতামূলক ইনহিবিটর বা ডিনাচারিং এজেন্ট ব্যবহার করা সহ। এটি একাধিক পদার্থের কার্যকর বিচ্ছেদ সক্ষম করে, এমনকি যদি পার্থক্য বা আইসোমারের একটি মাত্র সেট থাকে।
3. বিভাজন পদ্ধতিতে ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম, সংযোগকারী টিউব, থার্মোস্ট্যাট ইত্যাদি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামের দৈর্ঘ্য সাধারণত 10-50সেমি (যদি দুটি প্রয়োজন হয়, তাদের মধ্যে একটি সংযোগকারী নল যোগ করা যেতে পারে), যার ভিতরের ব্যাস থাকে 2-5মিমি, উচ্চ মানের স্টেইনলেস স্টীল বা মোটা প্রাচীরযুক্ত কাচের নল বা টাইটানিয়াম খাদ দিয়ে তৈরি। একটি নির্দিষ্ট পর্যায় আছে যার একটি কণার আকার 5-10 μm (একটি ম্যাট্রিক্স এবং একটি ফিক্সেটিভের সমন্বয়ে গঠিত)। স্থির পর্যায়ের ম্যাট্রিক্সটি উচ্চ যান্ত্রিক শক্তির রজন বা সিলিকা জেল দিয়ে তৈরি, যার জড়তা (যেমন ক্ষারীয় সিলিকা জেল সরানো হয়েছে), ছিদ্র (1000 পর্যন্ত ছিদ্রের আকার?), এবং বৃহৎ নির্দিষ্ট পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল রয়েছে। এগুলি কাপলিং (গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি স্থির পর্যায়গুলির প্রস্তুতির অনুরূপ), বা রাসায়নিকভাবে বিভিন্ন জিন (যেমন ফসফেট, কোয়াটারনারি অ্যামিনো, হাইড্রোক্সিমিথাইল, ফিনাইল, অ্যামিনো, বা বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের কার্বন চেইন অ্যালকাইল) বা লিগান্ড জৈব যৌগগুলির সাথে মিলিত হওয়ার জন্য প্রলিপ্ত। . সুতরাং, এই স্থির আপেক্ষিক কাঠামোর ভাল নির্বাচনযোগ্যতা রয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, ছিদ্রযুক্ত সিলিকা জেলের পৃষ্ঠে মটর অ্যাগ্লুটিনিন (পিএসএ) সংযুক্ত করার পরে, ফাইব্রোব্লাস্টের গ্লাইকোপ্রোটিনগুলি আলাদা করা যেতে পারে। উপরন্তু, স্থির ফেজ ভিত্তিক প্লাজমিড ছোট এবং কলামের বিছানা একটি অভিন্ন এবং ঘন অবস্থা অর্জন করা সহজ। এডি কারেন্ট ডিফিউশন প্রভাব কমানো সহজ। ম্যাট্রিক্স কণার আকার ছোট, মাইক্রোপোরগুলি অগভীর এবং মাইক্রোপোরাস এলাকায় নমুনার ভর স্থানান্তর ছোট। এগুলি ব্যান্ডউইথ কমাতে এবং রেজোলিউশন উন্নত করার জন্য উপকারী। কলাম প্রভাব তত্ত্ব বিশ্লেষণ অনুসারে, ম্যাট্রিক্স কণার আকার যত ছোট হবে এবং প্লেটের তাত্ত্বিক সংখ্যা N তত বড় হবে। এটি আরও প্রমাণ করে যে ম্যাট্রিক্স কণার আকার যত ছোট হবে, বিচ্ছেদ ডিগ্রি তত বেশি হবে। উপরন্তু, উচ্চ-কর্মক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি থার্মোস্ট্যাটগুলি ঘরের তাপমাত্রা থেকে 60 ডিগ্রিতে তাপমাত্রা সামঞ্জস্য করতে পারে, ভর স্থানান্তর হার বাড়িয়ে বিশ্লেষণের সময়কে ছোট করে।, এটি ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামের দক্ষতা উন্নত করতে পারে।
4. HPLC সনাক্তকরণ সিস্টেমের জন্য সাধারণত ব্যবহৃত ডিটেক্টরগুলির মধ্যে রয়েছে অতিবেগুনী ডিটেক্টর, রিফ্র্যাক্টিভ ইনডেক্স ডিটেক্টর এবং ফ্লুরোসেন্স ডিটেক্টর।
(1) UV ডিটেক্টর অতিবেগুনী (বা দৃশ্যমান) আলোর অধীনে শোষণ বৈশিষ্ট্য সহ নমুনা সনাক্ত করার জন্য উপযুক্ত। এর বৈশিষ্ট্য: ব্যাপক প্রয়োগের পরিসর (যেমন প্রোটিন, নিউক্লিক অ্যাসিড, অ্যামিনো অ্যাসিড, নিউক্লিওটাইডস, পেপটাইডস, হরমোন ইত্যাদি); উচ্চ সংবেদনশীলতা (10-10g/ml সনাক্তকরণ সীমা); প্রশস্ত রৈখিক পরিসীমা; তাপমাত্রা এবং প্রবাহ হার পরিবর্তনের জন্য সংবেদনশীল নয়; গ্রেডিয়েন্ট সল্যুশনের সাথে নির্গত নমুনা সনাক্ত করতে পারে।
(2) ডিফারেনশিয়াল রিফ্র্যাক্টিভ ইনডেক্স ডিটেক্টর মোবাইল ফেজ ডিটেক্টর দ্বারা শনাক্ত হওয়া থেকে ভিন্ন প্রতিসরাঙ্ক সূচক সহ সমস্ত নমুনা উপাদান সনাক্ত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। বর্তমানে, বেশিরভাগ কার্বোহাইড্রেট যৌগ এই সনাক্তকরণ সিস্টেম ব্যবহার করে সনাক্ত করা হয়। সিস্টেমের শক্তিশালী সার্বজনীনতা এবং সহজ ক্রিয়াকলাপ রয়েছে, তবে কম সংবেদনশীলতা (10-7g/ml সনাক্তকরণের সীমা), এবং মোবাইল পর্যায়ে পরিবর্তন প্রতিসরাঙ্ক সূচকে পরিবর্তন ঘটাতে পারে। অতএব, এটি ট্রেস বিশ্লেষণের জন্য বা গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন নমুনা সনাক্তকরণের জন্য উপযুক্ত নয়।
(3) ফ্লুরোসেন্স ডিটেক্টর শুধুমাত্র ফ্লুরোসেন্ট জৈব যৌগ (যেমন পলিসাইক্লিক অ্যারোমেটিক হাইড্রোকার্বন, অ্যামিনো অ্যাসিড, অ্যামাইনস, ভিটামিন এবং নির্দিষ্ট প্রোটিন) নির্ধারণের জন্য উপযুক্ত, নির্দিষ্ট পরিস্থিতিতে, প্রতিপ্রভের তীব্রতা এবং নির্গত আলোর ঘনত্বের উপর ভিত্তি করে। এর সংবেদনশীলতা খুব বেশি (শনাক্তকরণের সীমা 10-12~10-14g/ml), এবং এটি গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন কাজে ট্রেস বিশ্লেষণ এবং সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে।
5. ডেটা প্রসেসিং সিস্টেম পৃথক নমুনাগুলির জন্য পরীক্ষার ডেটা সংগ্রহ, সঞ্চয়, প্রদর্শন, মুদ্রণ এবং প্রক্রিয়া করতে পারে এবং সঠিকভাবে প্রস্তুতি বা সনাক্তকরণের কাজ করতে পারে